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          人血清白蛋白?HSA的檢測試劑及定量檢測方法
          瀏覽次數:487發布日期:2022-11-01

          人血清白蛋白的檢測試劑

          背景技術

          HSA是一種小分子量、非糖基化、帶負電荷的 血清蛋白,具有物質結合、運輸、抗氧化以及酶活性等多種功能。生理情況下,白蛋白是 細胞外液中含量多的蛋白質,其中血漿白蛋白含量為35~50g/L,約占血漿總蛋白的60%, 遠高于組織間液中的蛋白含量。白蛋白主要在肝臟合成,但不在肝臟內貯存,由肝細胞直接 分泌到竇狀隙中進入血液循環,半衰期為17~19d,終由肌肉、肝臟和腎臟等降解。


          HSA具有協調維持血管內皮完整性,抗氧化作用,臟器功能保護,維持膠體滲透壓, HSA還有保護血細胞、調節凝血、作為氮源為損傷組織修復提供營養等作用。因此,開發檢測 迅速,操作簡單,成本低廉的HSA檢測方法具有重要意義。


          本發明提供了一種定量測定生物樣品中白蛋白含量的方法及應用,具體為HCAB可 與白蛋白特異性結合,抑制了扭曲分子內電荷轉移現象,非輻射躍迀減少,從而恢復熒光, 實現白蛋白的定量檢測。在生理pH值條件下被激發后(激發波長λ Μ= 424 nm)產生穩定的 熒光信號(發射波長λ_= 560 nm)。其熒光值強度與白蛋白的濃度成正比,根據檢測到的熒 光值可推算出生物樣品中白蛋白的含量。該方法可用于測定血漿、尿液等多種生物樣品中 白蛋白的絕對含量,同時還具有靈敏度高、準確度高、、易于高通量檢測 的優勢,并且操作簡單,成本低廉。


          具體實施方式

          下面的實施例將對本發明予以進一步的說明,但并不因此而限制本發明。

          探針1的合成: 1 · 3mmol的化合物3 (2 ' -羥基苯乙酮)、1 · 2mmol的化合物4溶解在 30mL乙醇中,再向其中滴加4.9mmol氫氧化鉀溶液。攪拌8 h,旋蒸除去溶劑,將剩余固體純 化(硅膠、乙酸乙酯-正己烷作為洗脫劑,1: 5,v/v),得到紅色固體160mg,為探針1,產率為 50%。探針 1 的 1HNMR (400 MHz,CDC13): δ 13.19 (s,1H),7.91 (d,J = 7.0 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.37-7.49 (m, 2H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85-6.96 (m, 1H), 6.69 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.05 (s, 6H)。


          探針HCAB的合成: 將0 · 5mmol的探針1和0 · 5mmol的三乙胺加入到10mL的四氫呋喃中,再將苯甲酰氯(0.6 mmol,混合5mL四氫呋喃)在30分鐘內逐滴加入反應混合物中,在0°C下攪拌lh,然后升溫至 室溫攪拌過夜。旋蒸除去溶劑,剩余固體純化(硅膠、乙酸乙酯-正己烷作為洗脫劑,l:3,v/ v),得到103 mg的固體,為探針HCAB,產率為55%。探針HCAB的1H NMR (400 MHz, CDC13): δ 8.13 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.54 (m, 3H), 7.35 (m, 6H), 6.94 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.58-6.60 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.01 (s, 6H); 13CNMR (100 MHz, CDCI3): 191.84, 165.02, 152.06, 148.63, 146.91, 133.51, 133.42, 131.65, 130.42, 130.31, 129.80, 129.29, 128.49, 125.95, 123.40, 122.25, 120.71, 111.71, 40.99; HRMS: m/z calcd for C24H21NO3: 371.1521 and found 371.1522。


          探針2的合成: 將0.5mmol的探針1和0.5mmol的三乙胺加入到10mL的四氫呋喃中,再將乙酰氯(0.6 mmol,混合5mL四氫呋喃)在30分鐘內逐滴加入反應混合物中,在0°C下攪拌lh,然后升溫至 室溫攪拌過夜。旋蒸除去溶劑,剩余固體純化(硅膠、乙酸乙酯-正己烷作為洗脫劑,1:3,v/ v),得到82mg的固體為探針2,產率為53%。探針2的1H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42-7.56 (m,4H), 7.32 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.03 (s, 6H), 2.22 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCh): 191.85,169.44, 152.15, 148.48, 146.74, 133.16, 130.45, 131.73, 129.74, 125.93, 123.33, 122.20, 120.39, 111.83, 40.10, 21.01. HRMS: m/z calcd for C19H19NO3: 309.1365 and found 309.1372。

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